达学堂·答疑讨论
Q:脱水程序完成后,蜡浸泡在脱水机里,组织在蜡缸里一两个小时会有影响吗?
答:没有影响,哪怕浸过夜也没有影响。为了使组织对基因重排没有影响,我们 一般周五取材,周五晚上脱水,周六早晨就把组织浸在蜡里面,一直到下周一再 来包埋,是没有问题的。
Q:胃肠大标本切片时,为什么肌肉层更容易出现空洞?
答:在切的时候,每一层的硬度是不一样的,当蜡浸得越充分的时候,切片的时候黏性大,切片的时候不太容易出现空洞。空洞怎么来的?空洞就是在修片的时候,蜡的黏度性下降,组织整块掉下来了,所以容易出现空洞,这个时候多细修一下,空洞很快就没有了。
Q:福尔马林色素如何处理掉?
答:碱性酒精。80%酒精100ml加1%氢氧化钾1ml,把片子泡在碱性酒精里面,就可以把色素去掉。其实很少 能看到福尔马林色素。
Q:夏天的时候切片容易产生一层水雾是怎么回事?
答:有的时候潮湿,脱水不是很好的情况下,组织里的水很容易进去。
Q:并不是每块组织都需要脱脂,无水酒精加二甲苯会影响脱水效果吗?
答:不会的。脱水时间够的情况下,二甲苯对组织没有任何影响。
扩展
Ø 二甲苯时间长了,组织会发硬发脆,这个理论是错误的。
我试过在二甲苯下面透明过夜,组织非常好切,根本就不会出现发硬发脆。我也曾经试过二甲苯在 62 度的温度下过夜,也没有发现发硬发脆。
Ø 二甲苯是在什么情况下会造成组织发硬发脆 ?
其实二甲苯只有在浸蜡过程中才会造成组织发硬发脆,即:组织发硬发脆都是在浸蜡过 程中引起的。原因如下:
(1)二甲苯有一个特点:当温度升高的时候,它可使水析出。如同南方在潮湿的时候,染完的片子从酒精里出来,倒了二甲苯马上发浑,这个浑说明很多水进去了。这时只需把二甲苯放到温箱里面半小时,水就沉在了二甲苯的底部,二甲苯就会变清,高温会使二甲苯的水析出来。
(2)当温度升高的时候,二甲苯可使水析出,同时如果组织脱水不彻底,则在浸蜡的过程中,二甲苯就会把水析出来。由于水和蜡不相溶,在水析出来的过程中,水把石蜡挡在了组织的外面。而蜡的特点是蜡会紧紧地把这个组织包住,组织内温度迅速升高,导致组织里面没有蜡的情况下,组织干烤,就会发硬。所以组织发硬就是在脱水不充分的情况下产生的因此,当切片不好切时,我们一定要考虑浸蜡的因素,会不会蜡里的二甲苯带过去太多了。
Q:当天下午3点取材,送来的标本也接着取,基本上没做大标本剖开固定,类似情况免疫组化是否可靠?
答:免疫组化固定不好的话,结果是有问题的。我做过好像有些抗原会丢失,有些抗原也有增强的现象,似乎对免疫组化会有影响,所以还是要固定充分的。
Q:如果选择环保固定液,对后期免疫组化分子会不会有影响?
答:环保固定液用的是用醇性固定液会有略微影响,但是对分子不会有影响。